微量精准助力长沙市第一医院研究团队
发现低病毒载量患者在HIV-1 DNA水平上
存在优势耐药突变位点
中南大学湘雅医学院附属长沙医院（长沙市第一医院）感染病中心王敏教授团队，联合暨南大学生命科学技术学院王通教授团队，在HIV-1耐药相关研究领域取得了重要成果——HIV-1低病毒载量患者外周血HIV-1前病毒DNA中存在优势耐药位点（drug resistance mutations, DRMs），这提示HIV-1 DNA基因型耐药检测可为艾滋病治疗方案的制订和调整起到重要的参考作用。
东莞微量精准医学检验实验室为该研究提供了关键创新检测技术HIV-1 DNA基因型耐药检测。
1、HIV-1 DNA基因型耐药检测介绍
临床上用于判断抗逆转录病毒疗法（antiretroviral therapy, ART）治疗效果的重要方法是检测血浆病毒载量（viral load, VL）。研究[1]表明4%-10%的HIV-1感染者，在接受 ART 治疗后，仍维持低病毒载量（low viral load，LVL）。这类HIV-1感染者出现病毒学失败，产生耐药性的风险更高。
基于Sanger测序的传统HIV-1 RNA基因耐药检测方法面对VL<1000 copies/mL的HIV-1感染者时，病毒基因的扩增失败率较高；加拿大艾滋病诊疗指南提出对HIV-1 RNA<1000 copies/mL的患者，可以进行HIV-1前病毒DNA基因型耐药检测。
HIV-1前病毒DNA在患者个体水平存在高度的变异性，Sanger测序的原理是对所有序列中丰度占比最高的优势DNA序列（dominant sequence）进行优先测序，这些优势序列的占比理论上要超过总序列数的40%。HIV-1 DNA水平的DRMs信息代表HIV-1感染者外周血HIV-1储存库中的优势DRMs。
2、研究介绍
研究团队共检测5795例抗病毒治疗半年以上的HIV-1感染者的VL，以连续两次检测VL均在50-1000 copies/ml范围作为入组标准之一，共纳入26例研究对象。对26例HIV-1感染者进行HIV-1 DNA定量检测与HIV-1 DNA基因型耐药检测，以巢式RCR扩增HIV-1 pol区基因并进行Sanger测序，使用斯坦福大学HIV耐药数据库等工具对序列信息进行分析。
共发现7例HIV-1前病毒DNA携带优势DRMs：
4例携非核苷类逆转录酶抑制剂（NNRTIs）优势DRMs
1例携核苷类逆转录酶抑制剂（NRTIs）优势DRMs
1例携蛋白酶抑制剂（PIs）优势DRMs
1例携整合酶抑制剂（INSTIs）优势DRMs
共3例呈现低度及以上耐药，其中1例对于目前使用的抗病毒治疗方案中的药物产生低度耐药，其余均为潜在耐药。
3、东莞微量精准医学检验实验室为研究团队提供助力
在该研究中，东莞微量精准医学检验实验室提供了创新检测技术HIV-1 DNA基因型耐药检测，解决了低病毒载量患者耐药检测成功率低的技术瓶颈问题，证实了低病毒载量患者存在HIV-1 DNA水平的耐药突变。
为了进一步满足低病毒载量患者进行耐药检测的需求，东莞微量精准医学检验实验室研究与开发了HIV-1 基因型耐药检测全面解决方案，该解决方案包含：
（1）通过优化方法提高扩增效率，提供高敏的HIV-1 RNA基因型耐药检测；
（2）应用细胞外颗粒富集技术，通过有效富集病毒，进一步提高HIV-1 RNA基因型耐药检测成功率；
（3）若高敏HIV-1 RNA基因型耐药检测失败，则补充进行高敏HIV-1 DNA基因型耐药检测。
HIV-1基因型耐药检测全面解决方案通过技术的升级优化以及创新检测技术的引入，全面且有效地提高了低载量样本进行基因型耐药检测的成功率，解决了临床中HIV-1 RNA载量低于1000 copies/mL进行基因型耐药检测成功率低的技术瓶颈问题。
l 文献引用
文内引用：[1] CASTILLO-MANCILLA J R, MORROW M, COYLE R P, et al. Low-Level Viremia Is Associated With Cumulative Adherence to Antiretroviral Therapy in Persons With HIV[J]. Open Forum Infectious Diseases, 2021, 8(9): ofab463. .
文献来源：余维维,陈钟,彭爽等.HIV-1低病毒载量患者外周血前病毒DNA优势耐药位点分析[J].中国感染控制杂志,2022,21（04）:323-329.
文献链接：http://html.rhhz.net/ZGGRKZZZ/2022-4-323.htm
关于实验室
东莞微量精准检测研究院有限公司创建于2018年5月，公司下设东莞微量精准医学检验实验室，是广州海力特生物科技有限公司和暨南大学共同孵化，专注重大传染病方向的具有第三方医学检验技术资质的微量精准检测技术研究机构。
实验室专注于重大传染病病原体精准检测，以及癌症的极早期筛查和预警问题，为医院、疾控、高校、社康等临床或研究机构提供创新领先的微量精准检测服务。在未来，东莞微量精准医学检验实验室将不断创新及提升各领域重大传染病的超微量精准检测技术服务。
